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瑞禧定制DOTA-peg偶聯(lián)BSA/HAS/WGA/Transferrin/Streptavidins/Heparin等蛋白質(zhì)
DOTA是一種十二元四氮雜大環(huán)配體,本質(zhì)上是環(huán)楞胺中四個氮上的氫被乙酸基取代的產(chǎn)物. 實驗選取DOTA為雙功能螯合劑,采用戊二醛法將重金屬鉛離子分別與載體蛋白BSA和OVA偶聯(lián)制備免疫原和包被原,經(jīng)測定其結(jié)合比分別為13:1和9:1.用合成的免疫原免疫制備兔多克隆抗體并建立間接競爭ELISA(ic-ELISA),結(jié)果顯示,其icELISA線性回歸方程為y=12.014lnx-13.249(R2=0.9951),IC50和IC20分別為193.4 ng/mL和15.9 ng/mL,具有較好的檢測靈敏度.交叉反應(yīng)試驗顯示,除了與鎘交叉反應(yīng)率達20.4%外,該抗體與其它重金屬鐵,鉛和鋅等的交叉反應(yīng)率均小于6.4%,特異性較好.本研究成功制備鑒定了重金屬鉛人工抗原并制備了兔多克隆抗體.靈敏度和特異性分析表明:用雜環(huán)類雙功能螯合劑制備的重金屬人工抗原的制備效果較好,為下一步開展該雜環(huán)類雙功能螯合劑在重金屬快速檢測技術(shù)中的研究奠定基礎(chǔ).
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