關(guān)于多種熒光標(biāo)記多糖的技術(shù)及其應(yīng)用介紹

1 不同熒光物質(zhì)的標(biāo)記方法

1．1 熒光物質(zhì)8一萘胺-1。3，6三磺酸(8-aminonaphtalene-1。3，6-trisulfonic add。APTS) AVIS標(biāo)記14種混合的單糖和寡糖(對(duì)氨基半乳糖，氨基葡萄糖，葡萄糖，果糖，木糖，半乳糖，鼠李糖，水蘇四糖，乳糖，密二糖，氮乙酰氨基半乳糖，氮乙酰氨基葡萄糖，蔗糖，甘露醇)，熒光物質(zhì)和混合糖的比例隨著將0．1 tool·L AVIS加入到干燥的混合糖中的比例的不同而不同，APTS：多糖的比例從1：7變化到4：1，標(biāo)記效率沒(méi)有明顯改變。還原胺化反應(yīng)由加入的0．6 mol·L 的枸櫞酸和1．0 mol·L 的氰基硼氰化鈉催化，在75't2下反應(yīng)1 h，反應(yīng)后用水稀釋，衍生反應(yīng)至少重現(xiàn)三次，考察其穩(wěn)定性 j。將溶于15％冰醋酸的0．2 mol·L APTS與1 mol·L 的小麥淀粉溶液按I：1混合，在37℃下反應(yīng)15 h，然后用水稀釋后一70℃儲(chǔ)存 J。APTS的標(biāo)記機(jī)理如圖1所示。

1．2 熒光物質(zhì)8-氨基-1。3，6三磺酸芘(8-amlno-1。3。6-trisulphonic acid，ANTS) 硫酸化多糖用ANTS進(jìn)行標(biāo)記，方法是：將0．15 mol·L 的ANTS溶于30％ 的冰醋酸中，加入多糖在45't2下反應(yīng)15 min后，加入氰基硼氰化鈉，在40℃下反應(yīng)25 h，反應(yīng)結(jié)束后加水稀釋，溶液透析后進(jìn)行凍干保存。J。Josef Chmel等人也用ANTS標(biāo)記過(guò)右旋糖酐.

1．3 熒光物質(zhì)N-甲基靛紅酸酐(N—methylisatoic anhydride，M ) MIA標(biāo)記多糖是一種快捷，溫和，便利的方法，成功用于右旋糖酐和氨基半乳糖的標(biāo)記，標(biāo)記方法是：多糖(5—100 g·L )溶解在0．1 mol·L 的硼酸鹽溶液中，pH 8，加入50％的二甲基亞砜(DMSO)，10～20 g·L 的MIA溶解在DMSO中，混勻，室溫放置5～10 min后，加入上述溶液中。反應(yīng)迅速，可以儲(chǔ)存在一80％中72 h，DMSO的作用是防止DM—SO在水中不溶 J。MIA標(biāo)記多糖的機(jī)制如圖2所示。

1．4 熒光物質(zhì)5-氨基熒光素(fluoresceinamine，FLA) 一些易溶于水的多糖如果聚糖稱取40 mg的量溶于2．0 mL蒸餾水中，再加入30 mg溶于350 蒸餾水的溴化氰使之激活。還有一些糖如芽霉菌糖，昆布多糖，硫酸軟骨素，海藻酸均需溶解在氫氧化鈉水溶液中，超聲處理5 min，膜過(guò)濾后通過(guò)溶于硼酸鹽緩沖液的SephdexG一50，將FLA加入到收集樣品中。二次標(biāo)記可增加標(biāo)記效率 。

1．5 熒光物質(zhì)異硫氰酸熒光素(FITC)FITC標(biāo)記脂多糖的方法：將4 mg脂多糖加入2 mL的0．5％三乙胺溶液中0℃攪拌20 min，使脂多糖雙鏈解離為單鏈結(jié)構(gòu)。用10 的1mol·L 鹽酸將其PH值調(diào)節(jié)為5，然后加入含5 mg的FITC的0．1 mol·L 磷酸鈉溶液1．5 mL(pH9．5)，并在37~C下攪拌孵育3 h后，在4℃下將其混合物與磷酸鈉溶液徹底分離、離心后，去上清即得FITC．脂多糖 ?。FITC與殼聚糖連接的制備方法：在10．0 mL含1％ 殼聚糖的0．1 mol·L 乙酸溶液中，加入10．0 mL甲醇，再緩慢加入一定體積的2．0 g·L 的FITC甲醇溶液。室溫暗處反應(yīng)3 h后，用0．2 mol·L 氫氧化鈉沉淀標(biāo)記產(chǎn)物” 。

從褐藻中提取出來(lái)的海洋硫酸多糖911，由于其末端不含氨基，FITC標(biāo)記多糖的化學(xué)合成反應(yīng)分兩步：第一步：911一Tyr的合成，將400 mg 911溶于15 mL 0．2 mol·L 的磷酸鉀

緩沖液(pH 8．0)，然后依次加人400 mg酪胺和150 mg氰基硼氫化鈉，于37℃下反應(yīng)96 h，間或振蕩。反應(yīng)完畢，離心分離，將其上清液上Sephadex G-25柱，用水洗脫收集，280 llm

檢測(cè)，收集第一峰，凍干得911一Tyr。第二步：911一Tyr—F ITC合成，取200 mg 911一Tyr溶于水，用0．5 mol·L～NaHCO3調(diào)pH至8．5，然后加入25 mg F ITC，于室溫、避光下反應(yīng)過(guò)夜，再向反應(yīng)物中加入無(wú)水乙醇至乙醇終濃度為80％ ，有大量亮黃綠色沉淀析出，離心棄去上清液。沉淀加水復(fù)溶，乙醇再沉淀，條件同上，重復(fù)3次，得911一Try—F ITC，并進(jìn)一步上Sepha—dex G-25柱純化，收集相應(yīng)水洗脫組分凍干保存 。FITC標(biāo)記911一 Fyr的反應(yīng)機(jī)理如圖3所示。

1．6 熒光物質(zhì)2·氨基吡啶(Aminopyridine，2-AP) 2-AP溶于760 ILL的12 mol·L 鹽酸中，52．9 mg氰基硼氰化鈉溶于100 的水中。直鏈淀粉溶于90％ 的DMSO中，用1．8倍的水稀釋。首先將100 I 的直鏈淀粉溶液加至1O0ILL的2一AP溶液，60℃反應(yīng)1 h，再加入100 IxL的氰基硼氰化鈉，進(jìn)一步反應(yīng)24 h，反應(yīng)過(guò)后用水稀釋，加入300 的1一丁醇和3 L2mol·I 氯化鈉，混合物在4℃冰箱中放置1 h后直鏈淀粉沉淀析出 。

1．7 熒光物質(zhì)氟硼熒(4，4-difluoro-5，7-dimethyl-4一bora-3a，4adiaza—S—indacene一3一propionicacid，BODIPY)BODIPY通過(guò)還原末端對(duì)聚二糖進(jìn)行標(biāo)記。二糖進(jìn)行低壓凍干，凍干后溶于含BODIPY的甲醇溶液中。將樣品再次低壓凍干后重新溶解在DMSO中，加入5 iLL乙酸，離心后，室溫反應(yīng)4 h，再加入5 的1 mol·L。硼氰化鈉還原30 rain后進(jìn)行低壓凍干，標(biāo)記過(guò)后的樣品溶解在8 50％ 的DMSO中” 。

西安齊岳生物科技有限公司是國(guó)內(nèi)較大的糖類衍生物，我們常年銷售上百種糖化學(xué)衍生物試劑我們有氨基炔烴 醛基 疊氮和熒光標(biāo)記的各種結(jié)構(gòu)的半乳糖 甘露糖葡萄糖 纖維二糖 艾杜糖苷 殼聚二糖 巖藻糖 龍膽三糖 麥芽糖等不同產(chǎn)品。

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產(chǎn)品列表：

氨基糖苷類：

GlcNAc-Ser, CAS:160067-63-0

GlcNAc-Thr, CAS:160168-40-1 乙酰氨基葡萄糖蘇氨酸

GlcNAc-Asn, CAS:131287-39-3

GalNAc-Ser, CAS:120173-57-1

GalNAc-Thr, CAS:116783-35-8   

Man-Ser,   CAS:118358-80-8

Man-Thr,   CAS:169219-08-3  甘露糖蘇氨酸

熒光素-β-D-吡喃半乳糖苷 102286-67-9

熒光素-二-β-D-吡喃半乳糖苷   17817-20-8

熒光素-二-β-D-吡喃葡萄糖苷   129787-66-2

熒光素-二-β-D-吡喃葡萄糖醛酸甲酯      

熒光素-二-2-乙酰氨基-2-脫氧-β-D-吡喃葡萄糖苷 

M8046    4-甲基香豆素基-3,4,6-三-氧-乙?；?/span>-β-D-吡喃半乳糖苷      

M8047    4-甲基香豆素基 4-脫氧殼聚二糖     

M8048    4-甲基香豆素基-4-氧-（α-L-吡喃巖藻糖基）-β-D-吡喃半乳糖苷     383160-15-4

M8049    4-甲基香豆素基-4，6-氧-芐叉基-β-D-吡喃半乳糖苷    

M8050    4-甲基香豆素基-6-硫-十六?；?/span>-β-D-吡喃葡萄糖苷      229644-17-1

M8051    4-甲基香豆素基-α-D-吡喃阿拉伯糖苷    

M8052    4-甲基香豆素基-α-D-吡喃半乳糖苷 38597-12-5

M8053    4-甲基香豆素基-α-D-吡喃葡萄糖苷 17833-43-1

M8054    4-甲基香豆素基-4,7,8,9-四-氧-乙?；?/span>-α-D-唾液酸甲酯       59361-08-9

M8055    4-甲基香豆素基-α-L-呋喃阿拉伯糖苷     77471-44-4

M8056    4-甲基香豆素基-α-L-吡喃阿拉伯糖苷     69414-26-2

M8057    4-甲基香豆素基-α-L-吡喃巖藻糖苷  54322-38-2

M8058    4-甲基香豆素基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸-2-硫酸鈉鹽 1045020-74-3

M8059    4-甲基香豆素基-α-L-吡喃艾杜糖苷  66901-41-5

M8060    4-甲基香豆素基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸環(huán)己銨鹽     66895-33-8

M8061    4-甲基香豆素基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸鈉鹽     89157-94-8

M8062    4-甲基香豆素基-β-D-纖維二糖苷     72626-61-0

M8063    4-甲基香豆素基-β-D-纖維三糖苷    

M8064    4-甲基香豆素基 全乙?；瘹ぞ鄱?/span> 

M8065    4-甲基香豆素基-β-D-吡喃巖藻糖苷 55487-93-9

M8066    4-甲基香豆素基-β-D-吡喃半乳糖苷-6-硫酸    126938-14-5

M8067    4-甲基香豆素基-β-D-吡喃半乳糖苷-6-硫酸鈉鹽    206443-06-3

M8068    4-甲基香豆素基-β-D-龍膽三糖苷     383160-16-5

M8069    4-甲基香豆素基-β-D-吡喃葡萄糖醛酸（一水合） 6160-80-1

M8070    4-甲基香豆素基-β-D-吡喃葡萄糖醛酸（三水合） 199329-67-4

M8071    4-甲基香豆素基-β-D-吡喃乳糖苷     84325-23-5

M8072    4-甲基香豆素基-β-D-吡喃甘露糖苷 67909-30-2

M8073    4-甲基香豆素基-β-D-呋喃阿拉伯糖苷     195385-93-4

M8074    4-甲基香豆素基-β-D-吡喃木糖苷     195385-93-4

M8075    4-甲基香豆素基-β-L-吡喃阿拉伯糖苷    

M8076    4-甲基香豆素基-β-L-吡喃巖藻糖苷  72601-82-2

M8033    124167-45-9

M8034    4-甲基香豆素基-2-氨基-2-脫氧-α-D-吡喃葡萄糖苷       137687-00-4

M8035    4-甲基香豆素基-2-脫氧-2-硫酸氨基-α-D-吡喃葡萄糖苷鈉鹽       180088-52-2  

M8037    4-甲基香豆素基-2-氧-（α-L-吡喃巖藻糖基）-β-D-吡喃半乳糖苷     225217-42-5

M8038    4-甲基香豆素基-2，3-二-氧-苯甲酰基-4，6-氧-芐叉基-β-D-吡喃半乳糖苷      

M8039    4-甲基香豆素基-2,3,4,6-四-氧-乙?；?/span>-α-D-吡喃葡萄糖苷    67945-53-3

M8040    4-甲基香豆素基-2,3,6-三-氧-苯甲?；?/span>-β-D-吡喃葡萄糖苷  

M8042    4-甲基香豆素基-3-氧-（α-L-吡喃巖藻糖基）-β-D-吡喃半乳糖苷     296776-06-2

M8043    137686-93-2

M8044    137686-93-2

M8012    4-甲基香豆素-β-D-吡喃半乳糖苷     6160-78-7

M8013    4-甲基香豆素-β-D-吡喃葡萄糖苷     18997-57-4

M8014    4-甲基香豆素-α-D-吡喃甘露糖苷     28541-83-5

M8015    4-甲基香豆素-2-乙酰氨基-2-脫氧-β-D-吡喃葡萄糖苷   37067-30-4

M8017    4'-甲氧基-3,3',5-白藜蘆醇-3-β-D-吡喃葡萄糖苷     155-58-8

M8018    N-甲基-3-吲哚基-β-D-吡喃半乳糖苷       207598-26-3

M8019    N-甲基-3-吲哚基-α-D-吡喃阿拉伯糖苷  

3-羧基香豆素-β-D-吡喃葡萄糖醛酸 216672-17-2

3-羧基香豆素-β-D-吡喃半乳糖苷     64664-99-9

糖化學(xué)品：

CAS: 34369-07-8Adenosine 5-triphosphate disodium salt hydrate; ATP 腺苷-5'-三磷酸二鈉鹽

CAS: 116295-90-0 Uridine 5-triphosphatetrisodium salt dihydrate; UTP 5’-三磷酸尿苷三鈉

CAS: 3605-31-7 Guanosine 5-triphosphatesodium salt hydrate; GTP

CAS: 3605-68-0 Cytidine 5-triphosphatedisodium salt ; CTP

CAS: 2438-80-4 L-Fucose L(-)巖藻糖

CAS: 2042-27-5 L-Ribulose L-核酮糖

CAS: 16354-64-6 L-Psicose L-阿洛酮糖

CAS: 13074-08-3L-Fuculose 墨角藻糖

CAS: 87-96-7 L-Rhamnulose

CAS: 17598-82-2 L-Tagatose L-塔格糖

CAS: 527-50-4 L-木酮糖 L-Xylulose

CAS:551-68-8 D-Psicose D-阿洛酮糖

CAS:551-84-8 D-Xylulose D-木酮糖

D-arabinitol,CAS: 488-82-4 D-阿拉伯糖醇

3-deoxy-D-glucosone, CAS:4084-47-9

2-deoxy-D-xylose,CAS: 5284-18-4 ,2-脫氧-D-蘇式戊糖

D-rhamnose,CAS: 634-74-2 D-鼠李糖

6-iodo-6-deoxy-D-glucose, CAS: 6304-86-5,6-脫氧-6-碘-D-葡萄糖

6-fluoro-6-deoxy-D-galactose, CAS: 4536-07-6

3-fluoro-3-deoxy-D-glucitol,CAS:34339-82-7, 3-脫氧-3氟-D-葡萄糖醇

5-azido-5-deoxy-D-arabinose,CAS:161418-69-5, 5-疊氮-5-脫氧-D-阿拉伯糖

6-azido-6-deoxy-D-glucose, CAS: 20847-05-6,6-疊氮-6-脫氧-D-葡萄糖

6-azido-6-deoxy-L-galactose, CAS:70932-63-7, 6-疊氮基-6-脫氧-L-半乳糖

6-azido-6-deoxy-D-fructose, CAS: 115827-10-6,6-疊氮基-6-脫氧-D-果糖

3-acetylamino-3-deoxy-D-glucose, CAS: 606-01-9,3-乙酰氨基-3-脫氧-D-葡萄糖

CAS: 10149-14-1 L-阿洛酮糖

寡糖：

CAS:20972-29-6,3554-90-3,Galacto-N-biose,Gal-β1,3-GalNac 2-乙酰氨基-2-脫氧-3-O-(Β-D-吡喃半乳糖基)-D-吡喃半乳糖

CAS:489-52-1; 50787-09-2,Lacto-N-biose,Gal-β1,3-GlcNac,2-乙酰氨基-2-脫氧-3-O-(Β-D-吡喃半乳糖基)-D-吡喃葡萄糖

CAS:1674118-7, 24656-24-4,Blood Group HDisaccharide, Fuc-α1,2-Gal

CAS:41744-59-6,Isoglobotriose; α-Gal,Gal-α1,3-Gal-β1,4-Glc

CAS:66580-68-5 紅細(xì)胞三糖 Globotriaose,GD3, pK antigen,Gal-α1,4-Gal-β1,4-Glc

Blood Group Type II H-antigen, Fuc-α1,2-Gal-β1,4-GlcNAc 血型Ⅱ型H抗原

Blood Group Type III/IV H-antigen  血型III/IV型H抗原

Blood Group Type V H-antigen  血型V型H抗原

CAS:35890-38-1 ,3′-Sialyllactose, Sia-α2,3-Gal-β1,4-Glc 唾液乳糖

CAS:35890-39-2, 56144-12-8,6'-唾液乳糖 6′-Sialyllactose, Sia-α2,3-Gal-β1,4-Glc

Globo-N-pentaose,Gal-β1,3-GalNAc-β1,3-Gal-α1,4-Gal-β1,4-Glc

CAS:59957-92-5,血型A型四糖VI型 Blood GroupType V A-antigen

Blood Group Type V B-antigen