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瑞禧-薄膜水化-超聲法制備脂質(zhì)體

時(shí)間:2023-04-28 13:36:02       瀏覽:906
陽(yáng)離子脂質(zhì)體的制備用薄膜水化-超聲法制備脂質(zhì)體。按處方比例稱量脂材,溶于盛1 mL氯仿-甲醇( 1 ∶ 1 ,v/ v)的雞心瓶中,45℃水浴下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑,使脂材在瓶壁上形成一層均勻的膜,去掉水浴繼續(xù)抽真空1 ~2 h。取DFA儲(chǔ)備液( 100 ug · mL)水化脂膜,渦旋振蕩制成脂質(zhì)體。將脂質(zhì)體放入水浴中超聲5 min,過(guò)0.22 um水膜制備粒徑均一的脂質(zhì)體。分別制備由F-PEC-DSPE修飾的葉酸受體靶向脂質(zhì)體(DPPC/DC-cholF-PEG-DSPE,10 ∶ 10∶0.75,摩爾比)和PEC-DSPE修飾的非靶向脂質(zhì)體(DPPC/DC-chol/PEG-DSPE,10 :10:0.75 ,摩爾比)。
脂質(zhì)體粒徑及電位測(cè)定:將制備的脂質(zhì)體混懸液稀釋至適當(dāng)倍數(shù),用激光粒度分布儀測(cè)定脂質(zhì)體的粒徑大小及分布和電位。

脂質(zhì)體包封率的測(cè)定取包封DFA 的脂質(zhì)體混懸液0.5 mL加人葡聚糖C-50 凝膠柱( 1cm x15cm)中,以 PBS洗脫未包封的DFA 并收集脂質(zhì)體,以每份1.5 mL接取,記錄洗脫曲線,得到包封DFA的脂質(zhì)體混懸液。取分離后的包封 DFA的脂質(zhì)體混懸液0. 1 mL,加入10% Triton X-100溶液0.1mL破壞脂質(zhì)體,以 PBS稀釋到適宜濃度,測(cè)定溶液的熒光強(qiáng)度。另取0.1 mL未經(jīng)分離的脂質(zhì)體混懸液,同樣加入10% Triton X-100溶液0. 1 mL破壞脂質(zhì)體,用PBS稀釋到適宜濃度作為對(duì)照液測(cè)定熒光強(qiáng)度。經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線換算成濃度后計(jì)算包封率。


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