一.產(chǎn)品簡介

過氧化氫(H2O2)超快檢測試劑盒利用H2O2與顯色底物之間的反應(yīng)，生成紅色氧化產(chǎn)物，通過比色法或熒光法檢測樣品中的H2O2，反應(yīng)在10 s內(nèi)即可完成，檢測限為0.02 μM，可實現(xiàn)H2O2的超快靈敏檢測。

二.試劑盒組成與存儲

本試劑盒采用4 ?C運輸，收貨后請儲存在-20 ?C。

三.實驗步驟
1.溶液配制
增敏劑溶液：將1 mg增敏劑溶解在1 mL緩沖液中，得到增敏劑溶液。
（注：增敏劑溶解后請按每管50 μL或100 μL分裝保存至-20℃，避免反復(fù)凍融）
50 μM H2O2標準液：取10 μL H2O2母液(10 mM)，加入至1.99 mL緩沖液并混勻，該標準液可在4 ℃長期儲存。
檢測液（以配制1 mL為例）：取1 mL緩沖液，加入10 μL 顯色液和50 μL 增敏劑溶液。（注：1 mL檢測液可檢測20次，但標準曲線繪制需消耗6次，請合理計算檢測液配制量。檢測液配制后，可在4℃避光保存24h，使用時避免強光照射）。
2.分別取0、2.5、5、10、20、40 μL的50 μM H2O2標準液加入至96孔板中，并加入緩沖液補足至50 μL，得到濃度依次為0、2.5、5、10、20、40 μM的H2O2溶液。取50 μL待測樣品溶液，加入至另外的空白孔中。
3.向每個孔分別加入50 μL檢測液，避光反應(yīng)至少10s，通過酶標儀測定570 nm處吸光度，建立標準曲線，根據(jù)標準曲線計算樣品溶液中H2O2濃度。

四.注意事項
顯色液對光敏感，請注意避光保存和使用，使用過程中避免長時間強光照射；
檢測液須現(xiàn)配現(xiàn)用，若略微變紅，仍可正常使用；若顏色明顯變紅，建議重配；
若檢測過程中發(fā)現(xiàn)檢測溶液先快速變紅，后又褪色，說明待測樣品溶液中H2O2濃度過高，使得顯色底物氧化漂白。當(dāng)待測樣品溶液中H2O2濃度已經(jīng)超過檢測范圍時，應(yīng)將樣品溶液稀釋后再進行測定。
若檢測溶液中存在H2O2之外的其他強氧化物質(zhì)時，可能會導(dǎo)致假陽性。因此，建議增加不含H2O2的樣品溶液作為對照。
向樣品溶液中加入檢測液10s內(nèi)，溶液發(fā)生明顯的顯色反應(yīng)，10s后即可檢測出樣品中的H2O2。隨時間延長，顯色底物會被水中的溶解氧緩慢氧化，長時間放置(約12小時)，溶液顏色也會緩慢加深。因此，向樣品溶液中加入檢測液后應(yīng)及時檢測。
當(dāng)樣品溶液中H2O2濃度極低時，本試劑盒還可以通過熒光法檢測H2O2，最低可檢測0.02 μM的H2O2。具體步驟如下：
1）取5 μL的50 μM H2O2標準液，加入495 μL緩沖液，配制成0.5 μM H2O2標準液。
2）分別取0、2.5、5、10、20、40 μL的0.5 μM H2O2標準液加入至96孔板中，并加入緩沖液補足至50 μL，配制濃度分別為0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.4 μM的H2O2標準溶液。取50 μL待測樣品溶液，加入至另外的空白孔中。
3）向每個孔分別加入50 μL檢測液，避光反應(yīng)至少10s，采用酶標儀測定激發(fā)波長為540 nm，發(fā)射波長為590 nm處的熒光值，建立標準曲線，根據(jù)標準曲線計算樣品溶液中H2O2濃度。