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熒光標(biāo)記外泌體的步驟解析(含相關(guān)外泌體)

時間:2021-01-29 10:41:00       瀏覽:1623

西安瑞禧生物定制供應(yīng)熒光標(biāo)記外泌體、天然活性分子、膽酸、氨基酸、蛋白、配體、多肽、藥物、共聚物、衍生物、抗體、細(xì)胞、酶、凝集素、納米、糖類及適配體等。

 

外泌體(Exosome)是指包含了復(fù)雜 RNA和蛋白質(zhì)的膜性膜泡 (30-150nm),其直徑在30-150nm左右。外泌體的形成過程:細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中而形成外泌體。

外泌體天然存在于體液中,包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中,所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型也均可分泌外泌體。

 

制備熒光標(biāo)記外泌體的步驟如下

1.取200 ug/ml的C5-馬來酰亞-Alexa488(綠色熒光)或C5-馬來酰亞-Alexa633(紅色熒光)2.5 ul,加入提取好的含60- 100 ug蛋白質(zhì)的30ul外泌體樣品中,以PBS補(bǔ)足至50ul ,不攪拌的情況下于暗室中室溫孵育60分鐘。

⒉.在孵育時將exosome spin columns ( Invitrogen )試劑盒按照說明書準(zhǔn)備好并將粉末樹脂于室溫下水合15-30分鐘。

3.將裝有柱子的收集管于離心機(jī)水平轉(zhuǎn)子中以750x g離心2分鐘,棄收集管,向樹脂中加入熒光染料孵育后的外泌體

4.將柱子置于1.5ml微量離心管750x g離心3分鐘,多余的染料會被樹脂吸附

5.熒光標(biāo)記后的外泌體緩慢加入1000ul不含酚紅的DMEM,于0.22um過濾膜過濾后。分裝并儲存于負(fù)80度備用。

 

 

同時外泌體可與相鄰細(xì)胞和遠(yuǎn)端組織細(xì)胞相互作用,并且涉及許多疾病的發(fā)生發(fā)展,包括腫瘤等,外泌體還被認(rèn)為潛在的生物治療藥物的遞送載體,但其具體的作用方式與機(jī)制目前仍并不十分明確。因此用熒光探針在不影響外泌體大小和功能的情況下,直接或間接標(biāo)記細(xì)胞外囊泡,可在研究中在不影響功能的情況下實(shí)現(xiàn)可視化,幫助相關(guān)研究的進(jìn)行。

 

人源肝癌細(xì)胞HepG2外泌體

胰腺β細(xì)胞外泌體

HPV陽性頭頸部鱗狀細(xì)胞癌外泌體

人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞來源的外泌體

小膠質(zhì)細(xì)胞外泌體

人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞( BM-MSC)來源的外泌體

大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體

神經(jīng)元外泌體

腫瘤細(xì)胞分泌的包裹仿生多孔硅納米顆粒的外泌體(E-PSiNPs )

成牙本質(zhì)細(xì)胞分泌外泌體

神經(jīng)元來源的外泌體Aβ42、T-tauP-T181-ta

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M2型小膠質(zhì)細(xì)胞衍生的外泌體(M2-EXO )

活化肝星狀細(xì)胞分泌外泌體

間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體

轉(zhuǎn)移性黑色素瘤外泌體PD-L1

外泌體miR-21

膀胱癌細(xì)胞分泌的外泌體

外泌體LNMAT2

人真皮成纖維細(xì)胞分泌的外泌體

CAR-T細(xì)胞分泌的外泌體

心臟祖細(xì)胞(CPC)來源的外泌體

葉酸-外泌體

膠質(zhì)瘤衍生的外泌體(GDEs )

常氧膠質(zhì)瘤衍生的外泌體(N-GDEs )

鈣化血管平滑肌細(xì)胞(CVSMC)分離的外泌體

心肌梗死血清中的心腎外泌體

外泌體miR-20b-5p

人類原發(fā)性垂體腺瘤中提取外泌體lncRNA H19

脂毒性肝細(xì)胞分泌的外泌體miR-192-5p

肝臟外泌體來源的miR-130a-3p

缺氧膠質(zhì)瘤衍生的外泌體( H-GDEs )

 

序號 新聞標(biāo)題 瀏覽次數(shù) 作者 發(fā)布時間
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