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蛋白標(biāo)記的主要目的是監(jiān)測生物過程、輔助檢測(例如化合物的可靠定量、蛋白質(zhì)修飾的特異性檢測)或者純化標(biāo)記后的蛋白及其結(jié)合對象。蛋白質(zhì)的標(biāo)記能夠提高檢測靈敏度以及簡化檢測工作流程。
目前有多種蛋白質(zhì)標(biāo)記技術(shù)來幫助我們研究感興趣的蛋白質(zhì)的豐度、位置、相互作用、翻譯后修飾、功能,乃至監(jiān)測活細(xì)胞中的蛋白質(zhì)運(yùn)輸?shù)葐栴}。目前有多種類型的標(biāo)記物和標(biāo)記方式可供選擇,但是針對特定的應(yīng)用應(yīng)當(dāng)選擇適合的標(biāo)記策略。
熒光蛋白標(biāo)記:
將目的蛋白與熒光蛋白融合,則能夠?qū)崿F(xiàn)目的蛋白的細(xì)胞內(nèi)觀察,可用于多色標(biāo)記和熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)應(yīng)用,用于可視化蛋白質(zhì)與其他亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的易位,研究蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)共定位,檢測來自不同啟動(dòng)子的基因表達(dá)的開始,以及混合細(xì)胞群的分離。從早期的綠色熒光蛋白GFP發(fā)展到現(xiàn)在,我們已經(jīng)擁有了覆蓋多種光譜區(qū)域的熒光蛋白,包括綠色熒光蛋白、藍(lán)色和藍(lán)綠色熒光蛋白、黃色熒光蛋白、橙色熒光蛋白、紅色熒光蛋白,不同光譜型的熒光蛋白在亮度、光穩(wěn)定性、分子大小上有所不同。
熒光染料蛋白體外標(biāo)記
熒光染料標(biāo)記蛋白或多肽技術(shù)是常見的蛋白體外標(biāo)記技術(shù),除了GFP等融合表達(dá)熒光蛋白之外,目標(biāo)蛋白經(jīng)過熒光染料標(biāo)記可以直接進(jìn)行活體示蹤、細(xì)胞分選等下游實(shí)驗(yàn)操作。
原理:熒光標(biāo)記所依賴的化合物稱為熒光物質(zhì)。熒光物質(zhì)是指具有共軛雙鍵體系化學(xué)結(jié)構(gòu)的化合物,受到紫外光或藍(lán)紫光照射時(shí),可激發(fā)成為激發(fā)態(tài),當(dāng)從激發(fā)態(tài)恢復(fù)基態(tài)時(shí),發(fā)出熒光。蛋白熒光標(biāo)記技術(shù)利用熒光物質(zhì)共價(jià)結(jié)合在目標(biāo)分子的某個(gè)基團(tuán)上,利用它的熒光特性來提供被研究對象的信息。
應(yīng)用和特點(diǎn):活化的熒光染料,例如FITC、7-氨基-4-甲基香豆素(AMC)、羅丹明B(Rhodamine B)或Alexa Fluor染料等,可用于標(biāo)記抗體或蛋白功能基團(tuán),生成分子探針并通過熒光成像進(jìn)行檢測。當(dāng)用熒光染料化學(xué)標(biāo)記特異性抗體或其他純化的生物分子時(shí),它們成為用于檢測靶抗原或相互作用配偶體的熒光探針,應(yīng)用于細(xì)胞成像、流式細(xì)胞術(shù)、蛋白質(zhì)印跡和酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)。因?yàn)闊晒鈽?biāo)記物具有無放射物污染、操作簡便等優(yōu)點(diǎn),使其在蛋白功能研究、藥物篩選等許多研究領(lǐng)域的應(yīng)用日趨廣泛。
蛋白量子點(diǎn)標(biāo)記
原理:量子點(diǎn)(Quantum Dots)是一種無機(jī)納米結(jié)晶體,它可以根據(jù)其大小發(fā)出特定波長的熒光,它具有非常高的消光系數(shù),其消光系數(shù)要比小分子熒光基團(tuán)和熒光蛋白高出10~100倍,同時(shí)量子點(diǎn)的量子產(chǎn)率也很好。典型的量子點(diǎn)都含有一個(gè)CdSe或CdTe核心,外面包裹一硫化鋅(ZnS)外殼。量子點(diǎn)的吸收波長范圍覆蓋從非常短的波長至略低于其發(fā)射波長的廣闊范圍,因此一束單波長激發(fā)光就可以讓量子點(diǎn)達(dá)到多重發(fā)射。
應(yīng)用和特點(diǎn):目前研究出的水溶性量子點(diǎn)和油溶性量子點(diǎn)可以與抗體、鏈霉親和素等分子進(jìn)行偶聯(lián),應(yīng)用于生物標(biāo)記檢測、高通量編碼、活體成像及動(dòng)態(tài)示蹤等領(lǐng)域。不過結(jié)合了生物大分子的水溶性量子點(diǎn)體積較大(直徑約10 nm~30 nm),從而阻礙了它通過細(xì)胞膜結(jié)構(gòu),因此只能用于經(jīng)過透化處理的細(xì)胞,或者只能對胞外蛋白或可以被細(xì)胞內(nèi)吞的蛋白進(jìn)行研究。
熒光標(biāo)記蛋白:
熒光標(biāo)記的anti-CD4蛋白
熒光標(biāo)記血小板糖蛋白
熒光標(biāo)記甘露糖 6-磷酸-人血清白蛋白(M6P-HSA)
熒光標(biāo)記熱休克蛋白HSP27
熒光標(biāo)記硒結(jié)合蛋白 1 SBP1
熒光標(biāo)記鋅指蛋白160
熒光標(biāo)記微管蛋白α6 α-tubulin
熒光標(biāo)記微絲蛋白質(zhì)粒
熒光標(biāo)記微管骨架蛋白質(zhì)粒
熒光標(biāo)記重組靈芝免疫調(diào)節(jié)蛋白
熒光標(biāo)記的GSTP1蛋白
熒光標(biāo)記乳蛋白
熒光標(biāo)記抗原蛋白
熒光標(biāo)記納米顆粒包被哈氏弧菌抗原蛋白TssJ
熒光標(biāo)記豬血源纖維蛋白
熒光標(biāo)記自噬底物蛋白p62
熒光標(biāo)記自噬特異性蛋白LC-3Ⅱ
熒光標(biāo)記骨橋蛋白 OPN
熒光標(biāo)記當(dāng)歸蛋白(ASPR)
熒光標(biāo)記內(nèi)質(zhì)網(wǎng)跨膜蛋白PERK
熒光標(biāo)記力達(dá)霉素輔基蛋白
熒光標(biāo)記LDM輔基蛋白
熒光標(biāo)記自噬特異性蛋白LC3-Ⅱ
熒光標(biāo)記牛血纖維蛋白原
熒光標(biāo)記hVDAC1重組蛋白
序號 | 新聞標(biāo)題 | 瀏覽次數(shù) | 作者 | 發(fā)布時(shí)間 |
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