膠質(zhì)瘤是一種惡性原發(fā)性腦**疾病，由于耐藥性和血腦屏障 (BBB) 和血**屏障 (BTB) 等影響使得治療非常困難。為了克服這些障礙，有科研團(tuán)隊(duì)嘗試設(shè)計(jì)了T7和DA7R雙肽修飾的脂質(zhì)體（縮寫為 T7/DA7R-LS），有效地將阿霉素 (DOX) 和長(zhǎng)春新堿 (VCR) 共同遞送至膠質(zhì)瘤細(xì)胞中。

文獻(xiàn)簡(jiǎn)述

神經(jīng)膠質(zhì)瘤臨床管理的一個(gè)主要障礙是存在血腦屏障 (BBB)，傳統(tǒng)的納米載體可以提高滲透性和滯留（EPR）效應(yīng)并跨越生理障礙。然而，缺乏特異性靶向，效果不佳。

近年來，主動(dòng)靶向給藥系統(tǒng)已經(jīng)證明了改善膠質(zhì)瘤治療結(jié)果的潛力。其中噬菌體是一種獨(dú)特的靶向劑T7 (HAIYPRH)，它以高親和力和特異性與轉(zhuǎn)鐵蛋白受體 (TfR) 結(jié)合。TfR在腦內(nèi)皮細(xì)胞和腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中均過表達(dá)，據(jù)此T7 肽廣泛被用作靶向藥物遞送系統(tǒng)中的配體，用于BBB穿透和神經(jīng)膠質(zhì)瘤治療。

另一個(gè)屏障是血**屏障（BTB），它限制了藥物在**中的積累，有研究發(fā)現(xiàn)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2 (VEGFR 2) 在腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中高度表達(dá)，因此，VEGFR 2成為膠質(zhì)瘤靶向給藥的理想靶點(diǎn)。d-肽DA7R對(duì) VEGFR 2具有高親和力。最近，據(jù)報(bào)道DA7R修飾的脂質(zhì)體可以通過穿過BTB并靶向有效抑制膠質(zhì)瘤生長(zhǎng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞。

此外，單一藥物療法用于治療癌癥效果甚微，聯(lián)合療法可以克服耐藥性更加有效。有研究表明稱阿霉素（DOX）和長(zhǎng)春花生物堿長(zhǎng)春新堿（VCR）是常用的抗**藥物。臨床實(shí)踐其會(huì)受到心臟毒性和耐藥性的阻礙。

據(jù)此可將DOX和VCR作用于**細(xì)胞的不同靶點(diǎn)。它們的組合不僅可以有效地克服耐藥性，而且還可以降低心臟毒性。對(duì)于DOX 和 VCR 的協(xié)同作用，它們的優(yōu)化劑量比被測(cè)量為 4:1。

這里假設(shè)通過使用雙靶向（T7 和DA7R 肽）和聯(lián)合治療（DOX和VCR）策略來克服多種生理障礙（BBB 和 BTB）和耐藥性，可以實(shí)現(xiàn)全身性膠質(zhì)瘤靶向給藥。

T7和DA7R 在含有 DOX 和 VCR的 PEG 化脂質(zhì)體（縮寫為 T7/DA7R-LS）的表面上進(jìn)行了修飾。

靶向分子偶聯(lián)物的合成和表征

通過將DSPE-PEG 2000 -Mal分別與 T7 和D A7R上的半胱氨酸殘基綴合來合成DSPE-PEG 2000-T7和DSPE-PEG2000-DA7R 。T7和DA7R在室溫下與含有三乙胺(TEA，5當(dāng)量)的氯仿中的DSPE-PEG 2000 -Mal(1:1摩爾比)結(jié)合，同時(shí)攪拌24小時(shí)。

將反應(yīng)混合物在蒸餾水中透析 (截留分子量 (MWCO) 3.5 kDa) 48 小時(shí)以去除氯仿和未反應(yīng)的肽。通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)將最終溶液蒸發(fā)并儲(chǔ)存在-20°C直至進(jìn)一步使用。

脂質(zhì)體的制備

通過脂質(zhì)膜的直接水合制備具有HSPC:Chol: DSPE-PEG2000(mol/mol, 50:43:7)組成的未修飾脂質(zhì)體 (N-LS) 稍作修改。

將所有脂質(zhì)或疏水性探針 (Cy5.5) 用氯仿-甲醇 (3:1, v/v) 溶解在梨形燒瓶中，隨后在真空下使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)形成干膜。然后使用 300 mM 檸檬酸緩沖溶液在 50 °C 下將脂質(zhì)膜水合 30 分鐘。為了控制尺寸，使用小型擠出機(jī)（Avanti，Canada）將脂質(zhì)分散體通過 100 nm 聚碳酸酯過濾器擠出 11 次。

T7 修飾的脂質(zhì)體 (T7-LS) 和D A7R 修飾的脂質(zhì)體 ( DA7R-LS) 按照相同的程序制備，除了 DSPE-PEG 2000被 DSPE-PEG 2000 -T7 和 DSPE-PEG 2000 - D A7R 綴合物部分取代。

DOX 和 VCR (4:1, w/w) 使用 pH 梯度法以 1:20 的藥物/脂質(zhì)質(zhì)量比加載到各種脂質(zhì)體制劑中，將上述制備的空白脂質(zhì)體懸液直接加入300 mM檸檬酸緩沖溶液中，加入DOX和VCR中，分別得到2.0和0.5 mg/mL的藥物濃度；

然后使用 100 mM Na 2 CO 3溶液將外相的 pH 值調(diào)節(jié)至 7.5 ，并在 55°C 下孵育約 30 分鐘。最后，載藥脂質(zhì)體通過 100 nm 聚碳酸酯過濾器過濾滅菌，并分裝到無菌小瓶中（DOX 1.6 mg/mL，VCR 0.4 mg/mL）。

此外，在C6**小鼠模型上評(píng)估了脂質(zhì)體的體內(nèi)靶向效率、協(xié)同**抑制作用。

結(jié)論

綜上科研學(xué)者成功研發(fā)了T7和DA7R修飾的雙配體脂質(zhì)體T7/DA7R-LS用以遞送阿霉素 (DOX) 和長(zhǎng)春新堿 (VCR)到**部位。該系統(tǒng)可以穿透BBB和BTB?；赥7/ D A7R-LS的膠質(zhì)瘤靶向能力，充分利用了DOX和VCR在膠質(zhì)瘤抑制中的協(xié)同作用，并限制了它們的毒性。是一種理想且有效的治療膠質(zhì)瘤的靶向肽納米療法。

本文涉及的科研材料

DSPE-PEG 磷脂-聚乙二醇

http://i3346.cn/pro/pro-3524.html

DSPE-mPEG 磷脂-甲氧基聚乙二醇

http://i3346.cn/pro/pro-811.html

DSPE-PEG-Mal 磷脂-聚乙二醇-馬來酰胺

http://i3346.cn/pro/pro-816.html

DSPE-PEG-DOX 磷脂-聚乙二醇-阿霉素

http://i3346.cn/pro/pro-13103.html

DSPE-PEG-HSPC 磷脂-聚乙二醇-氫化大豆磷脂

http://i3346.cn/pro/pro-38221.html

DSPE-PEG-DA7R 磷脂-聚乙二醇-DA7R肽

http://i3346.cn/pro/pro-39023.html

DSPE-PEG-T7 磷脂-聚乙二醇-T7肽

http://i3346.cn/pro/pro-14020.html

T7-LS T7修飾脂質(zhì)體

http://i3346.cn/pro/pro-39019.html

DA7R-LS DA7R修飾脂質(zhì)體

http://i3346.cn/pro/pro-39020.html

阿霉素修飾脂質(zhì)體

http://i3346.cn/pro/pro-5227.html

VCR修飾脂質(zhì)體

http://i3346.cn/pro/pro-39021.html

HSPC 氫化大豆磷脂酰膽堿

http://i3346.cn/pro/pro-32416.html

Cholesterol 膽固醇

http://i3346.cn/pro/pro-13767.html

DOX 阿霉素（科研用）

http://i3346.cn/pro/pro-1393.html

DAPI染色劑

http://i3346.cn/pro/pro-4993.html

本文涉及的合成技術(shù)

磷脂-PEG偶聯(lián)技術(shù)

http://i3346.cn/pro/progc-392-382.html

多肽定制技術(shù)

http://i3346.cn/pro/progc-540-513.html

載藥脂質(zhì)體定制及其他脂質(zhì)體定制技術(shù)

http://i3346.cn/pro/progc-532-517.html

靶向肽修飾脂質(zhì)體定制技術(shù)

http://i3346.cn/pro/pro-39022.html 

原文獻(xiàn)鏈接：https://www.tandfonline.com/doi/full/10.1080/10717544.2017.1344334

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