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蛋白偶聯(lián)多肽-載體蛋白修飾基團與Pfs48/45-158多肽偶聯(lián)的制備及應(yīng)用

時間:2022-02-17 17:38:43       瀏覽:527

多肽作為一種化合物,也是一類半抗原,缺乏一定的免疫原性,單獨的多肽通常太小不足以激起充分的免疫反應(yīng),而帶抗原表位的載體蛋白有利于刺激輔助性細(xì)胞,進一步誘導(dǎo)細(xì)胞免疫反應(yīng)。實驗中經(jīng)常利用多肽修飾基團與載體蛋白制備形成全抗原其中Pfs48/45抗原多載體蛋白偶聯(lián)可以增加多肽的特異性。

 

載體蛋白修飾馬來酰亞胺基團

用過濾器將溶解載體蛋白(rEPA或BSA)的緩沖液轉(zhuǎn)換乙二胺四乙酸EDTA,并調(diào)節(jié)蛋白濃度。Sulfo-EMCS粉末溶解,加入載體蛋白液中反應(yīng)1h,迅速轉(zhuǎn)換緩沖液至PBS-EDTA中,調(diào)節(jié)蛋白濃度測定載體蛋白上所加的馬來酰亞胺基團數(shù)量。

 

Pfs48/45-158多肽制備:

馬來酰亞胺修飾的載體蛋白滴定 Pfs48/45-158多肽,確定量和多肽的摩爾數(shù)。用PBS-EDTA配制多肽溶液,在7個反應(yīng)管中加入等量的多肽溶液,除第1管外,在第2~7管中加入載體蛋白rEPA-M或BSA-M,加入量逐漸遞增,在溶液上覆蓋氮氣后,22℃緩搖反應(yīng)1h;加入試劑測定As值,檢測反應(yīng)后殘余的Pfs48/45-158多肽。

 

載體蛋白偶聯(lián)Pfs48/45-158多肽:

根據(jù)滴定終點時的體積比,在馬來酰亞胺修飾的載體蛋白中加入過量的Pfs48/45-158多肽,覆蓋氮氣后,緩搖反應(yīng)1h;對PBS溶液充分透析以去除未反應(yīng)的Pfs48/45-158多肽。測定偶聯(lián)后的載體蛋白濃度,用二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)鑒定偶聯(lián)產(chǎn)物Pfs48/45-158-BSA

                                             

通過載體蛋白修飾馬來酰亞胺基團Pfs48/45-158多肽偶聯(lián)的制備,PIs48/45-158多肽與載體蛋白的分子特異性結(jié)合,使其生物活性增加。PIs48/45-158多肽與載體蛋白偶聯(lián)還形成全抗原對臨床醫(yī)學(xué)中的疾病起到一定控制免疫作用。這種方法簡便易操作,可使多肽-蛋白偶聯(lián)產(chǎn)物的質(zhì)量和穩(wěn)定性。

 

除此蛋白偶聯(lián)外,瑞禧生物還可提供磷脂-PEG偶聯(lián)多肽,PEG修飾多肽,共聚物修飾多肽,二氧化硅/上轉(zhuǎn)換/量子點修飾多肽,多糖修飾多肽,藥物偶聯(lián)多肽,MOF修飾多肽。

 

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