結(jié)腸癌是一種高危疾病，化療在對抗結(jié)腸癌方面發(fā)揮著重要作用。但缺氧限制了化療的治療效率，最終導(dǎo)致治療失敗。據(jù)此有科研團(tuán)隊(duì)設(shè)計(jì)了一種能夠減輕**缺氧微環(huán)境并增強(qiáng)化療效果的化學(xué)增敏系統(tǒng)—RA/RX脂質(zhì)體，使用pH敏感脂質(zhì)體共同遞送環(huán)肽RA-V作為化療藥物，反義寡核苷酸作為HIF-1α抑制劑（RX-0047）以減輕**缺氧，實(shí)現(xiàn)治療性自我監(jiān)測。 

文獻(xiàn)簡述

作為**治療的典型特征，缺氧會阻礙治療效果，主要是因?yàn)槿毖?*的分子變化，例如，作為重要標(biāo)志物的缺氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)可誘導(dǎo)基因，包括參與**血管生成、轉(zhuǎn)移、增殖等。有研究表明抑制HIF-1α表達(dá)可增強(qiáng)抗**作用。

最近，整合多種治療方式的聯(lián)合療法作為高效治療癌癥頗具潛力。因此構(gòu)建結(jié)合抗**藥物和HIF-1α抑制劑的聯(lián)合治療系統(tǒng)對于提高缺氧**的治療效果非常有效。但用于聯(lián)合治療的傳統(tǒng)化療藥物仍存在靶向性差、聚集性低等缺點(diǎn)，需要不具備這些特性的新型化療藥物。

科研人員發(fā)現(xiàn)藥用植物云南茜草的環(huán)肽RA-V（deoxybouvardin）具有獨(dú)特的化學(xué)結(jié)構(gòu)和優(yōu)異的抗**功效，據(jù)報(bào)道，RA-V在體外和荷瘤鼠中表現(xiàn)出抗**活性，并且可以抑制炎癥、血管生成和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

最新研究中發(fā)現(xiàn)RA-V可以阻斷轉(zhuǎn)化生長因子-β-活化激酶1(TAK1)與TAK1結(jié)合蛋白2(TAB2)的相互作用，后者通過抑制NF-κB信號通路，導(dǎo)致HIF-1α表達(dá)降低。因此，RA-V是一種很有前途的抗癌劑，可與HIF-1α抑制劑一起構(gòu)建聯(lián)合治療系統(tǒng)，用于缺氧**的協(xié)同治療。

據(jù)此科研團(tuán)隊(duì)制備了一種聯(lián)合治療納米系統(tǒng)（RA/RX 脂質(zhì)體），用于針對缺氧**的高效治療和凋亡過程中caspase-8激活的實(shí)時(shí)成像。在該系統(tǒng)中，RA/RX脂質(zhì)體pH敏感殼中的環(huán)肽RA-V可通過線粒體途徑誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡，RA/RX脂質(zhì)體核心中的反義寡核苷酸可同時(shí)抑制HIF-1α的表達(dá)。

為了進(jìn)一步提高結(jié)腸癌的選擇性，將選擇性識別結(jié)腸直腸**細(xì)胞上的促凋亡細(xì)胞表面受體的抗DR53與脂質(zhì)體表面結(jié)合。獲得的RA/RX脂質(zhì)體可以通過選擇性進(jìn)入結(jié)腸癌細(xì)胞受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用進(jìn)入溶酶體，其中酸性微環(huán)境刺激脂質(zhì)體釋放有效載荷。用Cy5.5熒光素和暗猝滅劑 (BHQ-3)標(biāo)記的caspase-8特異性底物肽(IETD)（稱為caspase-8探針）也被摻入到RA/RX脂質(zhì)體中，以提供真正的caspase-8激活的時(shí)間監(jiān)測。

RA/RX脂質(zhì)體的制備

通過薄膜水合法制備脂質(zhì)體。將DOPE (32 mg)、CHEMS (16 mg)、DSPE-mPEG2000-COOH (3 mg)、Dio (1 mg)和RA-V (0.42 mg) 溶解在 50 mL 圓形溶液中的 10 mL 氯仿中。然后使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在45°C真空下干燥以獲得薄的脂質(zhì)膜，將其在真空下干燥過夜以使有機(jī)溶劑蒸發(fā)。然后，通過在60°C下以180 rpm的速度旋轉(zhuǎn)圓底燒瓶2小時(shí)，使脂質(zhì)膜在8 mL溶液中水合（總共2 mgRX-0047和1mg caspase-8 探針）。然后用探針超聲儀對所得懸浮液進(jìn)行超聲處理（在 100 W 的功率下總共進(jìn)行 2 分鐘，具有1秒的開/關(guān)脈沖）。為了使顆粒均勻，將脂質(zhì)體擠出通過0.22μm的膜。最后使用透析膜 (MWCO = 14 kDa, Millpore) 純化脂質(zhì)體2小時(shí)以分離游離試劑。將溶解在pH 5.0的MES緩沖液中的10 (mol/mol) 用于活化脂質(zhì)體中的羧基，將其加入到3 mL脂質(zhì)體懸浮液中，在室溫下適度攪拌1小時(shí)。離心以消除未使用的試劑后，將脂質(zhì)體重新懸浮在3 mL磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)中。將抗DR5溶液(40μg)添加到活化的脂質(zhì)體中，使其在4°C下孵育過夜，脂質(zhì)體中的羧基與肽的氨基反應(yīng)。類似的程序用于制備空脂質(zhì)體RX-0047脂質(zhì)體和RA-V脂質(zhì)體。

結(jié)論

綜上科研團(tuán)隊(duì)成功制備了靶向化學(xué)增敏RA/RX脂質(zhì)體，作為缺氧**高選擇性和有效的聯(lián)合療法。抗DR5靶向特異性和pH響應(yīng)特性確定RA/RX脂質(zhì)體對細(xì)胞水平的程序性藥物遞送具有高選擇性。RA/RX脂質(zhì)體還在RA-V介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡過程中實(shí)現(xiàn)了顯著的HIF-1α沉默，以增強(qiáng)缺氧**的化療效果。更重要的是，RA/RX脂質(zhì)體使用caspase-8原位激活的動態(tài)可視化實(shí)現(xiàn)了治療性自我監(jiān)測。

本文涉及的科研材料

DSPE-mPEG-COOH 磷脂-甲氧基聚乙二醇-羧基

http://i3346.cn/pro/pro-43084.html

DOPE 二油?；字Ｒ掖及?/a>

http://i3346.cn/pro/pro-745.html

caspase-9 重組蛋白

http://i3346.cn/pro/pro-43082.html

Cy5.5-IETD-BHQ-3（caspase-8 探針）花菁染料Cy5.5-暗猝滅劑-特異性底物肽

http://i3346.cn/pro/pro-43083.html

LysoTracker Red 溶酶體紅色熒光探針

http://i3346.cn/pro/pro-37235.html

Cy5.5 花菁染料Cy5.5

http://i3346.cn/pro/pro-8769.html

本文涉及的科研定制技術(shù)

PEG衍生物定制

http://i3346.cn/pro/proc-383.html

納米載體定制技術(shù)

http://i3346.cn/pro/progc-558-513.html

納米載藥定制技術(shù)

http://i3346.cn/pro/proc-517.html

多肽定制技術(shù)

http://i3346.cn/pro/progc-540-513.html

熒光染料標(biāo)記定制

http://i3346.cn/pro/proc-445.html

熒光探針定制

http://i3346.cn/pro/pro-40564.html

原文獻(xiàn)鏈接：https://pubs.rsc.org/en/content/articlehtml/2019/bm/c9bm00905a

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